動物疫苗生產的核心環節就是病毒抗原的生產制造，傳統的轉瓶或雞胚工藝生產效率低、勞動強度大、批間差異大，這些先天的缺點造成了產品質量差，成本居高不下，已經不能滿足規�；B殖客戶的需求。生物反應器以其規模大、生產效率高、產品批間差異小的優勢在口蹄疫行業一經應用便迅速得到推廣，目前口蹄疫疫苗行業已經全部實現了生物反應器大規模懸浮培養。禽流感、狂犬、圓環等越來越多的疫苗品種正在試圖采用懸浮培養技術，它已經成為企業轉型升級的一把利器。
在山東濱州第二屆動物疫苗和佐劑技術沙龍上，鄭州愛科生物應邀并作了主題報告，與會同行反應強烈，根據多年的研發和生產經驗，現將有關懸浮培養的技術問題進行歸納整理，以感謝同行對愛科生物的厚愛，希望對行業有所幫助。
1、鄭州愛科生物提供哪些具體技術服務？
鄭州愛科生物專注于動物疫苗生物反應器全懸浮培養技術工業化應用研究。已經研究成熟的細胞系平臺有BHK21、MDCK、ST、Marc145、Vero-E6、MDBK、F81、293細胞，測試了狂犬病毒、豬偽狂犬病毒、禽流感病毒、豬細小病毒、藍耳病病毒、犬細小病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒和牛病毒，結果均超過國家標準。愛科生物為客戶提供從全懸浮細胞株到反應器設計以及大工業生產，最專業的技術支持。讓所有動物疫苗實現生物反應器全懸浮培養技術生產，讓中國制造動物疫苗全面達到世界先進水平是我們的使命。
2、轉瓶培養技術的優缺點如何？
優點： 固定投資少，簡單，技術成熟；缺點：占地面積大，規模小，勞動強度大，人力成本高，血清成本高，暴露環節多，產品質量不穩定、2D培養；應用：傳統車間，轉瓶批號，批生產100升以下活苗，技術終將被淘汰。
3、紙片載體培養技術的優缺點如何？
優點：固定投資少，技術相對簡單；缺點：放大困難，細胞觀察困難，自動化低，血清成本高，暴露環節多，2D培養；應用：長周期抗體或蛋白生產，產量小非致細胞病變活苗，如豬瘟活疫苗，技術在動物疫苗生產上受限。
4、球狀微載體和培養技術的優缺點如何？
優點：技術相對簡單，易于觀察，屬于生物反應器，介于貼壁和全懸浮培養技術之間；缺點：載體成本高，放大困難，貼壁條件苛刻，血清成本高，需胰酶消化，操作暴露環節較多，2D培養；應用：批產量200升左右非病變活苗或無需純化的高附加值死苗。
5、全懸浮培養技術的優缺點如何？
優點：培養簡單，長期成本低，易于觀察，無需胰酶消化，放大容易規模大，操作環節少，自動化程度高，3D培養，生長密度不受附著物限制；缺點：前期細胞培養馴化技術要求高，人員要求高，相對投資大；應用：活苗死苗均可以使用，通用性強，批產量大于500升純化滅活疫苗最具優勢。
6、工業化大規模生物反應器生產線的最大風險是什么？
污染，工業化規模大，一旦系統污染將帶來較大的原材料成本和時間成本，一般國際上標準污染率小于1%。因此生產線的設計原則是越簡單越好，暴露環節越少越好。
7、是不是所有的傳代細胞都可以實現全懸浮培養？
根據當前的研究經驗大部分傳代細胞系可以實現懸浮培養，如BHK21、MDCK、ST、Marc145、Vero-E6、MDBK、F81、293細胞細。
8、生物反應器培養病毒產量比轉瓶高多少？
以批次培養為例，一般來說，懸浮培養與轉瓶相比，兩者滴度相當或略高于后者，但是抗原含量明顯高于后者，在口蹄疫疫苗生產中非常明顯；至于通過多次換液提高細胞密度，達到高滴度的結果，一般工業上不采用，生產周期長、污染風險太高，大工業生產抗原產量夠用就可以。
9、禽苗病毒能否實現全懸浮培養？
禽苗當前主要采用雞胚生產，未來被傳代細胞和生物反應器取代是必然的；目前缺少對病毒敏感的禽源傳代細胞系，這是制約技術進步的主要原因；成本不是限制性原因，一般單位細胞培養成本是雞胚的四分之一。
10、生物反應器生產線病毒培養工藝如何確定？
根據病毒生長特點確定：CPE時間24h內的可以采用批次不換液培養；CPE時間48-64h內的可以采用批次換液接毒培養；無CPE的可以采用多批次換液或灌流培養。
11、生產線第一級種子生物反應器容積多大合適？
生產線放大級數越少越好，所以第一級種子罐越大越好，一般來說20-40升不銹鋼反應器為宜，因為5升以下是不需要使用反應器的，搖瓶即可；生產線運行強度高，一般不建議使用玻璃罐，容易損壞。
12、生產線最后一級病毒培養生物反應器容積多大合適？
滅活苗病毒培養罐體積一般1000升以上，性價比最好，生產效率高，抗原經得起純化；活苗生產線病毒培養罐體積100-200升，根據凍干機凍干能力確定。
13、生物反應器生產線的放大比例如何確定？
懸浮培養只是改變了培養方式，并未改變細胞的生長特性，所以與方瓶貼壁培養的傳代比例基本一致即1:4-5；若人為增大傳代比例，傳代前細胞必須換液提高密度，增大了時間成本和污染風險，得不償失。
14、生物反應器培養的抗原有沒有必要濃縮？
若是反應器培養滅活疫苗抗原，是必須要濃縮的，濃縮的目的不一定是因為抗原含量不足，主要是考慮抗原的純化和小體積儲存。
15、轉瓶生產線改為懸浮生產線哪些改造要點？
①反應器間層高4米以上；②培養罐和滅活罐容積要匹配；③車間外設計氣體間；④瞬間大體積帶毒廢水處理和帶毒尾氣處理；⑤應急電源、蒸汽；⑤反應器培養不需要溫室和局百，培養箱和超凈臺即可。
16、下一步全懸浮培養技術會在哪些產品上應用？
以BHK21細胞為平臺的大規模全懸浮培養技術在口蹄疫行業已經得到普遍應用，緊接著的是狂犬病和豬偽狂犬和乙腦滅活疫苗行業；以MDCK懸浮細胞為平臺的禽流感行業正在進行車間改造和工藝變更，緊接著的是寵物和經濟動物病毒疫苗，尤其是是水貂和狐貍的細小病毒滅活疫苗；以MDBK懸浮細胞為平臺的牛病毒性疫苗產品；以ST懸浮細胞為平臺的豬瘟活疫苗和細小病毒滅活疫苗；以PK15懸浮細胞為平臺的豬圓環病毒滅活疫苗；
17、生物反應器懸浮培養技術對行業產生什么影響？
全病毒類動物疫苗在相當長的時間內還將主導動物疫苗市場；生物反應器全懸浮培養技術將巨大的放大單位車間的產能和提高產品質量，這將進一步助推行業兩極分化，加快企業間兼并重組的步伐。
